WATERS液相色譜柱根據(jù)功能分為HPLC和UHPLC、UPLC柱,根據(jù)內(nèi)徑大小又有常規(guī)分析柱,、窄徑柱和毛細管柱的類型區(qū)別,其中應(yīng)用廣泛的液質(zhì)聯(lián)用儀就是用的窄徑柱。因為分析類的儀器主要致力于對樣品成分的判斷,就需要能夠準(zhǔn)確分離少量樣品的內(nèi)徑較小的色譜柱。
WATERS液相色譜柱的儲存液無特殊說明,均為評價報告所示的流動相。在使用前,一定要注意儲存液與要分析樣品的流動相是否互溶。在反相色譜中,如用高濃度的鹽或緩沖液作洗脫劑,應(yīng)先用10%左右的低濃度的有機相洗脫劑過渡一下,否則緩沖液中的鹽在高濃度的有機相中很容易析出,造成堵塞。
在使用中一定要避免出現(xiàn)以下的情況:
一、避免反沖:一般來說色譜柱不能反沖,只有使用說明書上標(biāo)明該柱可反沖才可以反沖除去留在柱頭上的雜質(zhì)。否則會降低柱效。
二、避免直接改變?nèi)軇┑慕M成:在需要改變檢測樣品溶液組成時,應(yīng)逐漸改變?nèi)軇┑慕M成,特別是反相色譜中,不應(yīng)直接從有機溶劑改變?yōu)槿渴撬?,反之亦然。且在使用次洗脫能力強的洗脫液沖洗色譜柱時,對流路系統(tǒng)中流動相的置換應(yīng)以相混溶的溶劑逐漸過渡,每種流動相的體積應(yīng)是柱體積的20倍左右。
三、避免壓力和溫度的急劇變化:溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內(nèi)的填充狀況;柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內(nèi)填料,因此在調(diào)節(jié)流速時應(yīng)該緩慢進行,以保持內(nèi)填料的穩(wěn)定性。
四、禁止將緩沖溶液長時間存放在色譜柱內(nèi):保存時應(yīng)將柱內(nèi)充滿乙腈或甲醇,柱接頭要擰緊,防止溶劑揮發(fā)干燥。禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置過夜或更長時間。
五、禁止樣品未經(jīng)處理直接進入色譜柱:避免將基質(zhì)復(fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內(nèi),需要對樣品進行預(yù)處理或者在進樣器和色譜柱之間連接一保護柱。保護柱一般是填有相似固定相的短柱。保護柱可以而且應(yīng)該經(jīng)常更換。
六、禁止未經(jīng)處理直接封存:使用完成之后須使用相宜溶劑進行清潔處理,例如ODS柱宜用甲醇沖洗至基線平衡;當(dāng)采用鹽緩沖溶液作流動相時,使用完后應(yīng)用無鹽流動相沖洗;含鹵族元素(氟、氯、溴)的化合物可能會腐蝕不銹鋼管道,不宜長期與之接觸;裝在液相色譜儀上的色譜柱如不經(jīng)常使用,應(yīng)每隔4-5天開機沖洗15分鐘。
七、避免流動相使用不當(dāng)而破壞固定相:選擇使用適宜的流動相(尤其是pH),以避免固定相被破壞。有時可以在進樣器前面連接一段預(yù)柱,分析柱是鍵合硅膠時,預(yù)柱為硅膠,可使流動相在進入分析柱之前預(yù)先被硅膠"飽和",避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。